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Fluorocytométrie en flux

La fluorocytométrie en flux est utilisée pour analyser les propriétés physiologiques et chimiques des cellules. Elle peut également servir à analyser d'autres particules biologiques dans les analyseurs d'urines. Elle donne :

  • des informations sur la taille et la structure des cellules
  • des informations sur l'intérieur d'une cellule

 

Avec la cytométrie en flux, nous examinons les cellules et particules qui passent par une chambre de flux très étroite.

Dans un premier temps, un échantillon de sang est aspiré et proportionné, puis dilué pour atteindre une teneur prédéfinie et marqué à l'aide d'un fluorochrome s'attachant de façon spécifique aux acides nucléiques.

Puis l'échantillon est transporté dans la chambre de flux. L'échantillon est illuminé par un faisceau laser semi-conducteur, capable de séparer des cellules au moyen de trois signaux différents :

•             diffusion frontale de la lumière (FSC : « forward scatter »)

•             diffusion latérale de la lumière (SSC : « side scatter »)

•             fluorescence latérale de la lumière (SFL : « side fluorescence »).

L'intensité de la diffusion frontale montre le volume de la cellule ; la diffusion latérale donne des informations sur le contenu de la cellule, par exemple le noyau ou les granules. La fluorescence latérale indique la quantité d'ADN et d'ARN que contient la cellule.

Les cellules aux propriétés physiques et chimiques similaires forment un agrégat dans un graphique appelé scattergramme.

Le principe de la fluorocytométrie en flux est utilisé dans différents analyseurs d'hématologie et d'urines. Pour les numérations de cellules sanguines, nous utilisons la fluorocytométrie, p. ex. pour la numération et la formule des GB, la numération des GRN et la mesure des réticulocytes.

Dans les analyseurs d'urines, la technologie de la fluorescence est également utilisée pour compter des bactéries, des globules rouges, des globules blancs et d'autres éléments.

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