In der translationalen onkologischen Forschung ist die Optimierung der Nutzung der nur begrenzt vorliegenden biologischen Proben entscheidend, insbesondere wenn für eine umfassende Charakterisierung mehrere genetische Targets untersucht werden müssen. Forschungseinrichtungen setzen zunehmend fortgeschrittene molekulare Techniken ein – wie etwa dreifarbige Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierungs-Sonden (FISH-Sonden) –, um komplexe genomische Veränderungen effizient und mit minimalem Probenverbrauch zu untersuchen.

Eine Forschungsprobe, die von einem körperlich aktiven erwachsenen männlichen Spender ohne eine vorbestehende Knochenpathologie stammte, wurde im Anschluss an eine spontane Fraktur untersucht. Eine bildgebende Untersuchung ergab ausgedehnte osteolytische Läsionen, was zur Hypothese einer Plasmazellneoplasie, wie dem multiplen Myelom (MM), führte. Angesichts der Komplexität der Differenzialdiagnose wurde ein initiales Panel von FISH-Analysen durchgeführt, darunter:

TP53-Deletion
CKS1B/CDKN2C-Amplifikation/-Deletion
IGH/FGFR3-Breakapart/-Dual-Fusion
IGH/CCND1/MAF

Die dreifarbige CytoCell myProbes^® IGH/FGFR3 Breakapart/Dual Fusion erwies sich als besonders aufschlussreich und zeigte eine Deletion eines IGH-Allels und eine Umlagerung des zweiten Allels – Befunde, die mit konventionellen zweifarbigen Sonden wahrscheinlich übersehen worden wären. Auf der Grundlage dieses Ergebnisses wurde die Untersuchung dann um Folgendes erweitert:

IGH/MAFB-Dual-Fusion
IGH/MYC-Dual-Fusion

Weitere Untersuchungen identifizierten eine 1p-Deletion und eine t(8;14)-Translokation IGH::MYC / MYC::IGH. Diese Aberrationen sind in Standardpanels normalerweise nicht enthalten und wären ohne die breitere Multiplex-Strategie unentdeckt geblieben.

Dieser Fall unterstreicht die Bedeutung der durchdachten Sondenauswahl und der Testoptimierung in Forschungsworkflows, um klinisch relevante genomische Ereignisse aufzudecken, die andernfalls unentdeckt bleiben könnten.

Vorteile dreifarbiger FISH-Sonden

CytoCell myProbes^® IGH/FGFR3 Breakapart/Dual Fusion Probe V3 (MPD57050)

Sondenspezifikation

IGH, 14q32.33, rot/grün
FGFR3, 4p16.3, türkis

Der Einsatz dreifarbiger Sonden in der MM-Diagnostik reduziert die erforderliche Anzahl an Objektträgern, was im Fall einer geringen Anzahl CD138+-sortierter Zellen wichtig ist. Zudem erleichtert er die Beurteilung einer unbalancierten Translokation dank der Beobachtung eines unvollständigen IGH-Gensignals – ein Befund, der bei zweifarbigen Sonden und einem geringen Zellanteil als zufällige Signalüberlagerung interpretiert werden könnte.

Abb. 1. Sondenkarte von CytoCell myProbes® IGH/FGFR3 Breakapart/Dual Fusion Probe V3 (MPD57050).

Abb. 2. CytoCell myProbes® IGH/FGFR3 Breakapart/Dual Fusion Probe V3 (MPD57050). Das IGH-Gen (Chromosom 14) ist rot-grün und das FGFR3-Gen (Chromosom 4) blau dargestellt. Dies ermöglicht die Untersuchung der t(4;14)-Translokation sowie des Umlagerungsstatus des IGH-Gens auf einem einzelnen Objektträger. Beide Abbildungen zeigen ein normales Signalmuster, d. h. keine IGH-Umlagerung oder Translokation (4;14).

CytoCell myProbes^_® IGH/CCND1/MAF Dual Fusion Probe V2 (MPD22710)

Sondenspezifikation

IGH, 14q32.33, rot
CCND1, 11q13.3, grün
MAF, 16q23.1-q23.2, türkis

Der Einsatz der dreifarbigen IGH/CCND1/MAF-Sonden bietet zusätzliche Vorteile. Durch die Schließung der Lücke in der Markierung des MAF-Gens sowie die Abdeckung der Gene CCND1 und MYEOV ermöglicht sie den Nachweis von Aberrationen auf nur einem statt zwei Objektträgern und den Nachweis der t(11;14)-Translokation.

Abb. 3. Sondenkarte von CytoCell myProbes® IGH/CCND1/MAF Dual Fusion Probe V2 (MPD22710).

Danksagung

Ariel Najdowski
Senior Molecular Genetics Specialist
Abteilung für Molekular- und Zellgenetik
Nikolaus-Kopernikus-Universität in Toruń
Bydgoszcz, Polen

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